“LOS CAMBIOS EN LA LOCALIZACIÓN DE LAS PROTEÍNAS DEL COMPLEJO OCLUYENTE Y EN LA ACTIVACIÓN DE SRC CINASA, EN LA LÍNEA CELULAR DE CARCINOMA MAMARIO HUMANO MCF-7, SON DEPENDIENTES DE ESTRÓGENOS”.
Investigaciones previas demuestran que los estrógenos, en particular la hormona femenina Estradiol, tiene un efecto importante en la proliferación del cáncer de mama. A medida que las etapas del cáncer avanzan; es decir, en el inicio de la invasión y metástasis de dichas células, las uniones intercelulares, en especial las uniones estrechas u ocluyentes, se pierden por el desensamblaje del complejo que forman, lo cual a su vez provoca que se incrementen los procesos de invasión y metástasis. Dichos complejos están conformados por 3 proteínas: Ocludina, ZO-1 y ZONAB.
De manera que quiso investigar si el Estradiol produce algún cambio en la localización de las proteínas mencionadas, así como en la activación de la cinasa Src, que está implicada en el desensamble del complejo y en la pérdida de las uniones intercelulares.
Se incubaron células MCF-7, a concentraciones de estradiol 1 y 100nM a distintos intervalos de tiempo, para determinar la expresión y posteriormente la localización de las proteínas ZO-1 y ZONAB en las fracciones citoplasmáticas y nucleares mediante inmunodetección por hibridación tipo Western Blot y por inmunofluorescencia empleando microscopía confocal. Y los resultados fueron normalizados empleando a actina en la fracción citoplásmica y a la histona H1 en la fracción nuclear, utilizados por su expresión constitutiva.
Los resultados muestran un incremento en la expresión de las proteínas ZO-1, ZONAB y Ocludina. De modo que el estradiol incrementó la expresión de las proteínas ya mencionadas, se procedió a analizar su localización. Así, se muestra en gráficas posteriores el porcentaje de localización de ZO-1 y ZONAB tanto en la fracción nuclear como en la fracción citoplásmica. Y se muestra que conforme transcurre el tiempo, la expresión de las proteínas aumenta en el núcleo y disminuye en el citoplasma, lo cual indica que el estradiol es capaz de inducir la translocación de estas proteínas al núcleo. Este efecto puede ser explicado debido a que ZONAB puede funcionar como factor de transcripción y ZO-1 como co-activador transcripcional del proto-oncogen HER-2, los cuales inducen un aumento en la expresión del gen HER-2, el cual es el receptor del factor de crecimiento epidermal humano y está involucrado en proliferación celular. De esta manera, los resultados también demuestran que la expresión de HER-2 también se ve aumentada. Para corroborar lo previamente mencionado, se realizó un ensayo de inmunolocalización por microscopía confocal, donde finalmente se indica que ZO-1 se encuentra en la fracción nuclear.
Por otro lado, se determinó el porcentaje de activación de la cinasa Src; es decir, en su estado fosforilado. Y se corrobora que dicha activación se debe al efecto del estradiol al no observarse cambios significativos en la expresión de Src total. Lo cual indica que Src funciona como la señal transductora de la señal transducida por estradiol que provoca el desensamblaje de ZO-1 y ZONAB.
Se concluye que el estradiol es capaz de inducir la traslocación al núcleo de las proteínas ZO-1 y ZONAB por medio de la activación de la cinasa Src , generando así una acumulación de factores de transcripción en el núcleo que activan genes de proliferación celular; y al mismo tiempo, se abre la posibilidad de explicar el mecanismo molecular mediante el cual se debilitan las uniones estrechas, lo que guía posteriormente a la metástasis de las células cancerosas.
